时间分辨荧光法甲状腺过氧化物酶试剂,甲状腺过氧化物酶抗体化学发光法测定
1.体外诊断试剂的常规项目都包括哪些具体项目?什么是高附加值项目?最好具体说下。
2.时间分辨荧光分析法最常用的稀土金属
3.过氧化氢酶的测定
4.fitc荧光颜色
5.简述T细胞功能测定的常用方法
氧化酶(oxidase)过氧化物酶体中的主要酶类,氧化酶约占过氧化物酶体酶总量的一半,包括:尿酸氧化酶、D-氨基酸氧化酶、L-氨基酸氧化酶和L-α-羟基酸氧化酶等。
试剂:1%盐酸二甲基对苯二胺溶液:少量新鲜配制,干冰箱内避光保存。1%α-萘酚-乙醇溶液。
试验方法:取白色洁净滤纸沾取菌落。加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴,阳性者呈现粉红色,并逐渐加深;再加α-萘酚溶液一滴,阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色。阴性于两分钟内不变色。以毛细吸管吸取试剂,直接滴加于菌落上,其显色反应与以上相同。
过氧化物酶简介:
过氧化物酶是氧化还原酶的一种。分布在乳汁、白细胞、血小板等体液或细胞中,该酶的辅基亦为血红素,以H2O2为电子受体催化底物氧化的酶,它催化H2O2直接氧化酚类或胺类化合物。
如谷胱甘肽过氧化物酶、嗜酸性粒细胞过氧化物酶和甲状腺过氧化物酶等,具有消除过氧化氢和酚类胺类毒性的双重作用,反应如下:R+H2O2RO+H2O或RH2+H2O2一R+2H2O临床诊断中观察粪便中有无隐血,就是利用红细胞中含有过氧化物酶的活性,将联苯胺氧化成蓝色化合物。
以上内容参考:百度百科-氧化酶,百度百科-过氧化物酶
体外诊断试剂的常规项目都包括哪些具体项目?什么是高附加值项目?最好具体说下。
植物体内过氧化物酶(POD)活性的测定通常采用光度法或荧光法。
光度法:将植物组织或提取物加入含有过氧化氢和双甲基苯酚的反应液中,过氧化物酶催化过氧化氢分解产生的游离基与双甲基苯酚发生氧化反应,生成苯醌衍生物,产生**或棕色的化合物。可以通过测定反应液的吸光度或比色板的读数来测定POD活性。
荧光法:将植物组织或提取物加入含有过氧化氢和荧光素的反应液中,过氧化物酶催化过氧化氢分解产生的游离基与荧光素发生氧化反应,产生一种高荧光产物,可以通过荧光光度计测定荧光强度来测定POD活性。
POD活性的测定可以反映植物内部的氧化应激水平和抗氧化能力,对于研究植物的生理生化过程和适应机制具有重要意义。
时间分辨荧光分析法最常用的稀土金属
项目名称 临床意义
游离T3(FT3) 与TT3基本相同,但比TT3更为灵敏,且测定值不受TBG的影响;在亚临床甲亢患者,病人甲亢症状不明显,TT3可在正常范围,但FT3多已升高
游离T4(FT4) 与TT4基本相同,但比TT4更为灵敏,且测定值不受TBG的影响
超敏促甲状腺素(hTSH) 升高:甲减、慢性淋巴细胞性甲状腺炎、地方性甲状腺肿、某些甲状腺激素腺瘤;降低:甲亢、肢端肥大症、库欣氏综合症
甲状腺球蛋白抗体(TGAb) 升高:慢性淋巴细胞性甲状腺炎、Graves病、甲减
抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb) 增高:自身免疫性甲状腺炎、慢性淋巴细胞性甲状腺炎、甲减、亚急性甲状腺炎、甲状腺癌等
甲功三项(T3、T4、hTSH) 判断甲状腺功能、鉴别免疫性疾病
游离甲功三项 (FT3、FT4、 hTSH) 主要用于原发和继发性甲低及甲亢诊断
甲功六项(FT3,FT4,hTSH,TGAb,T3,T4,TP0Ab,PTH) 判断甲状腺功能、鉴别免疫性疾病
甲状旁腺机能、钙磷代谢研究
降钙素(CT) 增高:见于甲状腺细胞良性腺瘤、甲状腺癌。恶性贫血、急性或慢性肾功能衰竭、甲亢,也可见于小细胞肺癌、胰腺癌、子宫癌、乳腺癌、前列腺癌等;减低:见于重度甲亢、甲状腺发育不全等。
性激素六项(FSH、 LH、 E2、 P 、T 、PRL) 闭经、性早熟、妊娠、不孕不育、泌乳素瘤等疾病的观察指标
促卵泡激素(FSH) 升高:见于男性不育、原发不孕、原发闭经、泌乳闭经、继发闭经、月经失调、原发性性功能障碍、早期垂体前叶功能减退、真性性早熟等。减低见于接受雌激素和黄体酮治疗、继发性性功能减退、多囊卵巢病变、假性性早熟、子宫内膜异位症。
促黄体生成素(LH) 升高:卵巢功能早衰、卵巢发育不良、性腺发育不全。降低:下丘脑、垂体功能障碍。
雌二醇(E2) 升高:垂体瘤、畸胎瘤、睾丸间质细胞瘤、多胎妊娠、肝硬化和SLE.降低:卵巢发育不全、无卵巢、继发性性腺功能不全、葡萄胎
孕酮(P) 升高:双胎或多胎妊娠、妊高症、子宫内膜腺瘤、妊娠中毒、17α-羟化酶缺乏;降低:原发性或继发性闭经、早产、不孕症、异位妊娠、黄体功能不全。
睾酮(T) 升高:睾丸细胞间质瘤、柯兴氏综合症、多囊卵巢综合症、先天性肾上腺皮质增生症、女性多毛症。降低:隐睾病、先天性睾丸发育不全综合症、睾丸炎、垂体功能减退、性发育不全、甲减、皮质醇增多症、骨质疏松症、系统性红斑狼疮
垂体催乳素或泌乳素 (PRL) 升高:垂体泌乳素瘤、下丘脑部位肿瘤、垂体瘤、原发性甲减、肾上腺皮质功能减退、肾衰、原发性性功能减退、多囊卵巢综合症、糖尿病。降低:席汉症或垂体肿瘤所致的垂体前叶损伤;多巴胺、左旋多巴等药物影响。
特异β绒毛膜促性腺激素(β-HCG) 升高:正常妊娠、早期绒癌、葡萄胎、肝癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、睾丸肿瘤;降低:异位妊娠、先兆流产、先兆流产。
促肾上腺皮质激素 (ACTH) 增高:见于应激状态、原发性肾上腺功能不全、库欣综合症、Nelson综合症、先天性肾上腺增生、垂体促肾上腺皮质激素细胞瘤。减低:见于垂体功能减退、肾上腺皮质肿瘤、垂体瘤、垂体前叶受损。
醛固酮(ALD) 增高见于原发性和继发性醛固酮增多症、长期口服避孕药;降低见于肾上腺皮质机能减退、选择性醛固酮减少症、先天性原发性醛固酮减少症。服用某些药物(心得安、甲基多巴、利血平、可乐宁)等抑制醛固酮分泌。
皮质醇(COR) 判断肾上腺皮质功能
骨钙素(OST) 骨代谢(骨形成)指标。
25-羟基维生素D 25-羟基维生素D是维生素D的特异性指标。可以检测骨骼代谢紊乱,如:骨软化,维生素D的过量和缺乏。可对钙的吸收做出评估
(25-OH-VD)
血糖 (GLU) 糖尿病诊断。
葡萄糖耐量试验(测4次血糖) 糖尿病鉴别诊断及治疗监测
胰岛素释放试验(测4次)胰岛素 糖尿病分型:1型释放曲线低平,2型释放曲线高峰后移
C-肽释放试验(测4次))C-肽 同胰岛素释放试验,但是结果不受临床胰岛素用药的影响
糖化血红蛋白(HbA1C) 反映病人2-3个月内平均血糖的水平,用于糖尿病疗效观察。
β2-微球蛋白(β2-MG) 糖尿病肾病患者早期即有肾小管功能改变,该检测被认为是衡量糖尿病患者启动肾功能减退和疗效观察的一项简便、精确而敏感的方法。
胰岛素(INS) 评估空腹低血糖糖尿病分类、预防糖尿病、评估β细胞活性,研究胰岛素抵抗。
C-肽 (C-P) 糖尿病分类、预防糖尿病,评估β细胞活性,监测胰腺手术疗效,不受外来胰岛素影响。
唐氏综合征Ⅱ期(AFP、游离β-HCG、UE3)(三联标记物) 运用风险评估软件结合年龄、体重、身高、孕周、吸烟史、糖尿病史等资料评估出胎儿患病的危险度,筛查21-三体综合征、18-三体综合征、神经管畸形等
优生四项项IgM(TOX-IgM,RV-IgM,CMV-IgM,HSV-IgM) 辅助诊断弓形虫 、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒感染
不孕不育抗体 辅助诊断免疫性不孕
抗心磷脂总抗体 (ACA) 辅助磷脂综合征(APS)、反复自然流产、死胎患者免疫学病因、血管炎的诊断,也可作为动静脉栓塞患者等自身免疫性疾病的辅助诊断依据。
抗精子抗体定量 (AsAb) 辅助诊断免疫性不孕
抗子宫内膜抗体 (EmAb)
抗卵巢抗体(AoAb)
抗HCG抗体(AhcgAb)
抗卵细胞透明带抗体(AZP) 原因不明的不孕检测
抗滋养层细胞膜抗体(ATA) 对原因不明的流产的免疫学病因诊断有重要意义。
人类白细胞分化抗原B27(HLA-B27)筛查 辅助诊断强直性脊椎炎,Reiter’s综合症,银屑病性关节炎,葡萄膜炎和溃疡性结肠炎伴有关节病及其鉴别诊断。
贫血三项(铁蛋白、叶酸、维生素B12) 贫血诊断、肿瘤辅助诊断
铁蛋白(FER) 缺铁性贫血诊断、肿瘤辅助诊断。
维生素B12 (Vitamin B12) 贫血诊断、白血病分型和病情监测。
叶酸(FOL) 贫血诊断、白血病分型和病情监测。
D-二聚体定量检测 D二聚体主要反映纤维蛋白溶解功能。
增高或阳性见于继发性纤维蛋白溶解功能亢进,如高凝状态、弥散性血管内凝血、肾脏疾病、器官移植排斥反应、溶栓治疗等。
1)D-Dimer是交联纤维蛋白降解中的一个特征性产物,在深静脉血栓、弥散性血管内凝血、心肌梗塞、重症肝炎、肺栓塞等疾病中升高。目前认为正常的D-二聚体水平是诊断深静脉血栓(DVT)或肺部栓塞(PE)的重要指标,但是建议D-二聚体的检测在抗凝治疗前进行。
2)也可作为溶栓治疗有效的观察指标。
3)在DIC中,纤溶系统被激活,D-二聚体水平甚高,检测D-二聚体水平有助于DIC的诊断;
人类白细胞分化抗原B27(HLA-B27)筛查 辅助诊断强直性脊椎炎,Reiter’s综合症,银屑病性关节炎,葡萄膜炎和溃疡性结肠炎伴有关节病及其鉴别诊断。
免疫五项(IgG,IgA,IgM,C3,C4 ) 辅助诊断免疫系统疾病
风湿四项(ASO,RF,CRP、CCP) 辅助诊断风湿性疾病。
抗核抗原抗体谱 (ENA)(包含Anti-U1RNP/Sm、Anti-Sm、Anti-SSA、Anti-SSB、Anti-JO-1、Anti-SCL-70、抗核糖体P蛋白抗体) 辅助诊断自身免疫性疾病。
抗双链DNA 抗体 (dsDNA) 1、系统性红斑狼疮(SLE)的特异性诊断指标;2.可用于SLE活动性及治疗判断。
抗双链DNA 抗体(dsDNA)定量 1、系统性红斑狼疮(SLE)的特异性诊断指标;2.可用于SLE活动性及治疗判断。
脱氧核糖核酸抗体 (DNA-Ab) 系统性红斑狼疮、结缔组织病等自身免疫性疾病的辅助诊断
抗脱氧核蛋白抗体 (DNP-Ab) 用于SLE的诊断及疗效观察。
抗核抗体(ANA) 辅助诊断自身免疫性疾病
抗循环瓜氨酸肽抗体(CCP)定量 类风湿性关节炎的特异性指标,可辅助早期诊断RA,降低致残率。
抗中性粒细胞胞浆抗体 (ANCA) 对系统性血管炎、炎症性肠病等疾病的诊断与鉴别诊断具有重要意义
抗平滑肌抗体(ASMA) 抗平滑肌抗体为自身免疫性肝炎1型的血清学标志抗体。
抗线粒体抗体(AMA) 1.抗线粒体抗体对于原发性胆汁性肝硬化(PBC)的特异性和敏感性均超过了95%,尤其以M2型特异性最高; 2.如出现AMA阳性,即使无PBC临床症状及生化异常,也强烈提示PBC,应列为高危人群,定期复查。
抗线粒体抗体亚型2、4、9 1.检测线粒体抗体亚型2.4.9; 2.辅助诊断原发性胆汁性肝硬化;
(AMA-2、4、9)
抗肾小球基底膜抗体 (GBM) 见于活动性的经典的抗肾小球基底膜病——Goodpaster综合症、也见于半月体形成性肾炎(60%)Rupus肾炎。
抗角蛋白抗体(AKA) 主要见于类风湿性关节炎患者,高抗体滴度可能预示着较严重的类风湿性关节炎
抗蛋白酶3抗体 (Anti-PR3) 韦格氏肉芽肿疗效、复发的指标
抗髓过氧化物酶抗体 (Anti-MPO) KD诊断,对判断预后亦具有一定意义
β2糖蛋白1抗体 (β2-GP1-Ab) β2糖蛋白1抗体对于APS的诊断,为特异性较高的指标(特异性达到98%),且与血栓史具有明显的相关性,抗体滴度与SLE血栓的严重程度正相关。
磷脂综合征APS两项(b2-GP1-Ab+ACA) 抗心磷脂抗体对于APS诊断敏感性较高,而b2糖蛋白1抗体特异性较高。二者联合检测时,灵敏度可提高到95%。可大幅提高APS的诊断准确性。对于反复自然流产,动静脉栓塞患者意义重大。
抗组蛋白抗体 (AHA) 辅助诊断药物(普鲁卡因胺,肼酞嗪以及其它药物)诱导性红斑狼疮及类风湿性关节炎。
抗核小体抗体 (AnuA) 用于早期诊断系统性红斑狼疮的早期,并且特异性较高。
血管炎抗体 (ANCA两项,ANCA-MPO,ANCA-PR3) 系统性血管炎、炎症性肠病等疾病的诊断。
自身免疫性肝炎 (ASMA,肝抗原谱,ANA) 辅助诊断自身免疫性慢性活动性肝炎AIH。
肝功(肝功1、ALT、AST、GGT、ALP、CHE、TBIL、DBIL、、TP、Alb、CG、AST/ALT) 评价肝功能
血脂糖(CHOL、TG、HDL-CH、LDL-CH、APOA1、APOB、、GLU) 用于动脉粥样硬化、高血压、冠心病等疾病诊断、预防和治疗
心肌酶(CK、AST、LDH、α-HBDH、CK-MB) 用于心肌梗塞、心肌炎、肌肉损伤等辅助诊断
电解质 (K、Na、Cl、Ca、Mg、P) 了解人体内电解质代谢情况
肾功全项(UA、Urea、Cr、β-MG、cys-c、CO2) 评价肾功能
总蛋白(TP) 在肝脏,肾脏,骨髓以及代谢性或者营养不良的诊断以及诊疗时经常检测总蛋白
白蛋白(ALB) 下降:肝硬化、慢肝、肾病综合症、营养不良、严重烧伤、大失血、恶性肿瘤。
球蛋白(GLOB) 增高:肝硬化、慢性感染、肾病综合症、风湿病
白蛋白/球蛋白(A/G) 严重肝病时A/G比值倒置
谷丙转氨酶(ALT) 增高:急性肝炎;重症肝炎;阻塞性黄疸;肝癌;急性心梗;急性胰腺炎
谷草转氨酶(AST) AST活性的升高是心肌梗死、肝病、肌肉损伤和器官伤害等的指示。
谷草/谷丙(AST/ALT) 增高:肝硬化、肝癌、皮肌炎 下降:传染性肝炎或其他肝炎
γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT) 测定谷氨酰转肽酶可以发现肝功能异常,尤其可以用来评估肝细胞损伤的严重程度.肝脏损伤型肝炎,多发性肝癌,阻塞性黄疸等血清中谷氨酰转肽酶的活性都会升高。
碱性磷酸酶(ALP) 碱性磷酸酶在发生梗阻时会升高,尤其是阻塞性黄疸.另外在骨骼系统疾病时碱性磷酸酶也会升高.骨折,骨骼肿瘤时碱性磷酸酶的活性同样可以升高
总胆红素(TBIL) 1、溶血性黄疸:总胆红素升高,间接胆红素高度增加、直接胆红素正常或微增。
直接胆红素(DBIL) 2、肝细胞性黄疸:三者均升高。
间接胆红素(IBIL) 3、阻塞性黄疸:总胆红素升高,直接胆红素高度增加,间接胆红素正常或微增。
尿酸(UA) 尿酸的检测应用于多种肾病以及代谢性疾病(如肾衰,痛风,牛皮癣,白血病,饥饿等)的诊断以及监测治疗。
总胆固醇(TC) 胆固醇的监测用于评估罹患动脉硬化的风险以及对脂类/蛋白质的代谢紊乱进行诊断和监测治疗。
甘油三酯(TG) 检测甘油三酯用于对患有糖尿病,肾病,脂代谢紊乱以及多种内源性疾病的诊断及监测治疗。
高密度脂蛋白胆固醇(HDL-CH) HDL的浓度与动脉硬化综合症的发病率有相关,所以检测血清中的HDL有助于防止罹患冠心病,而HDL浓度降低,尤其伴有甘油三酯浓度升高时,会增加心血管疾病的危险。
低密度脂蛋白胆固醇(LDL-CH) 低密度脂蛋白的胆固醇将存在于动脉粥样硬化的斑块中,对于评估罹患冠状动脉综合防治症的风险,作为一个单独的指标,LDL的浓度检测是最具有重要意义的指标。
载脂蛋白A1(ApoA1) 结合检测ApoA1和ApoB并且计算其比值能够反应脂类代谢异常以及患有动脉硬化和冠心病的危险程度,高浓度的载脂蛋白A-1和低浓度的ApoB与这些疾病的低风险相关良好。
载脂蛋白B(ApoB)
肌酸激酶(CK) 检测CK以及同工酶活性用于对心肌梗塞以及心肌病的诊断及监测治疗。
乳酸脱氢酶(LDH) 在各种疾病状态下都使血清LDH升高,最高的LDH水平见于巨幼红细胞性贫血、弥散性癌症和休克的患者。中度的升高见于肌肉损伤、肾病综合症和肝硬化。轻度升高见于心肌梗死、肺部梗死、白血病、溶血性贫血和非病毒性肝炎。
α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH) 血清中HBDH活性在急性心肌梗死时显著升高。
肌酸激酶同工酶MB(CKMB) CK-MB的检测对于诊断心肌缺血非常重要,在急性心肌梗塞、心肌炎来说,CK-MB在胸痛3-8小时就会升高,并在较长的时间内还能检测到。
总胆汁酸(TBA) 急性肝炎,慢性活肝,肝硬化,肝癌TBA结果明显升高。TBA测定用于监测慢性肝病意义更大,是一项很实用的肝功能诊断指标。
尿素(UREA) 用于对肾脏功能进行评估,以及用于鉴别肾前性高尿素血症,肾性高尿素血症,肾后性高尿素血症。
肌酐(CRE) 在急性/慢性肾性疾病的诊断,治疗以及对肾透析的监测时,肌酐的测定很有意义。
二氧化碳结合力 (CO2-CP) 了解电解质代谢。
血气分析 电解质代谢及酸碱中毒情况
淀粉酶(AMY) 临床上测定血清和尿液AMY主要用于诊断急性胰腺炎
磷(P) 增高:甲状腺功能减退、肾衰、骨肿瘤
镁(Mg) 检测镁离子的浓度用于对低镁血症及高镁血症进行监控及指导治疗。很多研究证明:镁离子的缺乏与钾、钙、磷的浓度改变相关,这种平衡的打乱会与心脏功能紊乱(如心率失常)有关。
胆碱脂酶(CHE) 增高:维生素B缺乏症、甲状腺机能亢进、高血压、糖尿病、肾病综合征等;
减低:有机磷农药中毒、肝实质细胞损伤、营养不良等
胱抑素C(CYSC) 胱抑素C是较血清肌酐有更高的敏感性和特异性,较为理想的反映肾小球滤过率(GFR)的内源性标志物。 50岁以下个体,当GFR下降到80ml/(min.1.73m2)以下,血清胱抑素C即有显著升高。
尿本周氏蛋白 尿液本-周氏蛋白尿液中的本—周氏蛋白是一种免疫球蛋白的轻链或轻链的多聚体,也称为γ微球蛋白或凝溶蛋白,存在于多发性骨髓瘤患者的尿液中。因此该化验的主要目的是筛查多发性骨髓瘤。
腺苷脱氨酶(ADA) 肝脏疾病:ADA活性是反映肝损伤的敏感指标,可作为肝功能常规检查项目之一,与ALT或GGT组成肝酶谱能较全面地反映肝脏病的酶学改变。
微量元素 检测人体内微量元素平衡状态,预防微量元素失衡所致疾病的发生。
铅(Pb) 铅为有毒金属元素,铅增高可引起肾上腺素皮质功能减退,高血压、贫血、胃肠功能紊乱,儿童智力下降和行为异常等,损伤生殖细胞及性功能。
甲型肝炎病毒抗体IgM (HAV-IgM) 辅助诊断甲型肝炎
乙肝六项(HBsAg/HBsAb/HBeAg/HBeAb/HBcAb、HBcAb.IgM) 判断慢性肝炎活动性或非活动性,反映病毒感染的状态,人群乙肝疫苗注射效果的判断等。
乙型肝炎病毒核心抗体IgM (HBcAb-IgM) 辅助诊断急性乙型肝炎
丙型肝炎病毒抗体 辅助诊断丙型肝炎
戊型肝炎病毒抗体 辅助诊断戊型肝炎
透明质酸(HA) 血清HA在急性,慢迁肝时轻度升高;慢活肝时显著升高;肝硬化时极度升高
甘胆酸 (CG) 甘胆酸(CG)是由胆酸与甘氨酸结合而成,是主要胆汁酸之一,测定CG的含量是评价肝功能的敏感指标之一,可作为肝炎治疗的监测,反映胆道通畅情况
沙眼衣原体(CT-DNA)定性 非淋菌性尿道炎、不孕症、宫颈炎
解脲支原体(UU-DNA)定性 宫颈炎、非淋菌性尿道炎
梅毒螺旋体(TP-DNA)定性 诊断梅毒
单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSVⅡ-DNA)定量 对单纯疱疹病毒药品治疗的监测与评价。
弓形虫(TOX-DNA)定性 弓形虫感染的早期诊断、流产后查因
沙眼衣原体抗原 (CT-Ag) 非淋菌性尿道炎、不孕症、宫颈炎。
艾滋病病毒抗体 (HIV-Ab) AIDS初筛
呼吸道合胞病毒抗体IgG (RSV-IgG) 辅助诊断呼吸道合胞病毒感染
粪便常规检测 胃肠道疾病及诊断肠道寄生虫等。
尿液分析+沉渣 泌尿道相关疾病及肾脏功能等
血培养(需氧)+药敏 辅助检查血液中的致病菌。
血培养(厌氧)+药敏 辅助检查血液中的致病菌。
一般细菌培养及药敏 辅助检查病原菌,诊断相关部位感染等。
前列腺特异抗原 (PSA、F-PSA、F-PSA/PSA) 前列腺癌的诊断及鉴别诊断
肺癌抗原相关二项(NSE、CF21-1) 小细胞/非小细胞肺癌的诊断和鉴别诊断
甲胎蛋白(AFP) 用于原发性肝癌的诊断,疗效预后监测;畸胎瘤及胎儿畸形诊断。病毒性肝炎、肝硬化患者AFP也会有不同程度的增高
癌胚抗原(CEA) 肺癌和肠癌的首选标志物。用于肺癌、子宫、乳腺、消化系统肿瘤、肝转移癌等诊断和治疗、复发监测、判断预后。
神经元特异性烯醇化酶(NSE) 肺癌的首选标志物,用于肺癌、甲状腺髓样癌、嗜铬细胞瘤、黑色素瘤、胰内分泌瘤的辅助诊断
角蛋白抗原21-1(CYFRA 21-1) 非小细胞肺癌等肿瘤的诊断
前列腺特异抗原(PSA) 前列腺癌的特异性标志物,前列腺肥大、前列腺炎或者前列腺按摩后也可轻度升高。
游离前列腺特异抗原(FPSA) 前列腺癌的辅助标志物,可用于前列腺癌的鉴别诊断。FPSA/TPSA比值有助于区分BPH和前列腺癌
α-L-岩藻糖苷酶(AFU) 对原发性肝癌进行疗效观察和监测术后复发
铁蛋白(FER) 广谱肿瘤标本物,用于肝癌、肺癌、缺铁性贫血辅助诊断
特异β绒毛膜促性腺激素 早孕;监测先兆流产、异位妊娠、滋养层细胞肿瘤、绒毛膜上皮细胞癌、葡萄胎、畸胎瘤、男性睾丸癌、睾丸间质瘤、精原细胞瘤、睾丸绒癌
糖类抗原50(CA50) 广谱肿瘤标志物,可用于胰腺、肝、卵巢、肠道、胃、肺等肿瘤的诊断和疗效监测
糖类抗原125(CA12-5) 卵巢肿瘤标志物。宫颈癌、子宫内膜癌、输卵管癌、乳癌等也可有一定程度的增高
附睾蛋白4 (HE4) 最新的卵巢癌筛查指标,可与CA125联合检测提高卵巢癌筛查的敏感性和特异性。
糖类抗原153(CA15-3) 乳腺癌的首选标志物,转移性卵巢癌、结肠癌、肝癌、胆管癌、胰腺癌、肺癌等也有不同程度的增高
糖类抗原199(CA19-9) 胰腺癌,胆道恶性肿瘤的诊断及为肠道肿瘤的诊断和疗效监测
糖类抗原724(CA72-4) 胃癌首选标志物,可用于肠癌、胰腺癌、肝癌的辅助诊断及疗效监测
高血压三项(A1、肾素活性(PRA)、醛固酮(ALD)) 高血压诊断,分型等应用。
肌红蛋白(MYO) 急性心肌梗塞早期鉴别诊断,肌肉创伤,皮肌炎等辅助诊断及再梗死诊断。
肌钙蛋白-Ⅰ(TPI) 确诊心肌梗塞,监测血栓溶剂疗效,心脏术后随访,判断病情,指导正确治疗。
B型脑利钠肽(BNP) 帮助筛选需做超声心动图的病人 ,可对心肌缺血和抗心衰治疗进行监测,有治疗监测等用途。
超敏C-反应蛋白 心、脑血管疾病风险预测指标。用于心、脑血管疾病诊断、观察及预后。
脂蛋白(α) 脂蛋白(a)出现于动脉壁,能致使动脉粥样硬化,血清脂蛋白a浓度增高和过早出现动脉粥样硬化和中风相关.
同型半胱氨酸 为心血管疾病,尤其是冠状动脉粥样硬化和心肌梗塞的危险性评价指标,其浓度升高程度与疾病的危险性成正比。
过氧化氢酶的测定
时间分辨荧光分析法最常用的稀土金属有Eu、Tb、Sm、Dy。
时间分辨荧光分析法(TRFIA)实际上是在荧光分析(FIA)的基础上发展起来的,它是一种特殊的荧光分析。普通的荧光分析利用了荧光的波长与其激发波长的巨大差异,克服了普通紫外-可见分光分析法中杂色光的影响,同时,荧光分析与普通分光不同,光电接受器与激发光不在同一直线上,激发光不能直接到达光电接受器,从而大幅度地提高了光学分析的灵敏度。
但是,当进行超微量分析的时候,激发光的杂散光的影响就显得严重了。因此,解决激发光的杂散光的影响成了提高灵敏度的瓶颈。
时间分辨荧光分析法的优点:
时间分辨荧光分析是以稀土离子标记抗原或抗体、核酸探针和细胞等为特征的超灵敏度检测技术,它克服了酶标记物的不稳定、化学发光仅能一次发光且易受环境干扰、电化学发光的非直接标记等缺点。
使非特异性信号降低到可以忽略的程度,达到了极高的信噪比,从而大大地超过了放射性同位素所能达到的灵敏度,且还具有标记物制备简便、对被标记物的生物活性和结构无影响、储存时间长、无放射性污染、检测重复性好。
可实现多种标记及多元测试、操作流程短、标准曲线范围宽、不受样品自然荧光干扰和应用范围十分广泛等优点,成为继放射免疫分析之后标记物发展的一个新里程碑。
fitc荧光颜色
以下是一般的过氧化氢酶测定步骤:
1. 样品制备:将待测样品制备成适当的浓度和体积。
2. 准备试剂:准备含有过氧化氢的试剂,通常是过氧化氢溶液。
3. 加入酶:将过氧化氢酶加入待测样品中,使其催化过氧化氢的分解。
4. 反应时间:将样品和试剂在一定的时间内反应,通常是在室温下反应几分钟。
5. 停止反应:加入一个停止反应的试剂,通常是一种酸或碱,以停止酶的活性。
6. 测定结果:使用特定的测定方法,如比色法或荧光法,来测定反应产生的产物的浓度,从而确定过氧化氢酶的活性。
过氧化氢酶活性测定,是根据过氧化氢酶(PHD)能催化过氧化氢生成氧的特性,常用碘量法和电极法。
前者通过测定PHD催化H2O2反应后剩余的H2O2与碘化物作用生成碘量的变化计算PHD活性。该法设备简易,但操作复杂,误差较大。
后者的原理是H2O2为有电活性物质,但经PHD催化后其产物为无电活性物质,用铂电极来测量PHD催化前后电流变化引起电压的变化,测出PHD活性大小。还可应用分光光度法、瓦氏呼吸仪检压法、硫酸高铈法等。
简述T细胞功能测定的常用方法
fitc荧光颜色
黄绿色荧光
橙红色荧光
橙色荧光
(一)荧光色素
1.异硫氰酸荧光素(FITC):呈现明亮的黄绿色荧光。
2.四乙基罗丹明(RB200):呈黄绿色荧光。。
3.四甲基异硫氰酸罗丹明(TRITC):呈橙红色荧光。
4.藻红蛋白(R-RE):呈明亮的橙色荧光。
(二)其他荧光物质
1.镧系螯合物:其中以Eu3+应用最广。Eu3+螯合物的激发光波长范围宽,发射光波长范围窄,荧光衰变时间长,最适合用于时间分辨荧光免疫测定。
2.酶作用后产生荧光的物质:4-甲基伞酮-β-D半乳糖苷本身无荧光,受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基伞酮,后者可发出荧光。其他如碱性磷酸酶的底物是4-甲基伞酮磷酸盐,辣根过氧化物酶的底物是对羟基苯乙酸等。
荧光色素
许多物质都可产生荧光现象,但并非都可用作荧光色素。只有那些能产生明显的荧光并能作为染料使用的有机化合物才能称为免疫荧光色素或荧光染料。常用的荧光色素有:
1.异硫氰酸荧光素(FITC):为**或橙**结晶粉末,易溶于水或酒精等溶剂。分子量为389.4,最大吸收光波长为490~495nm,最大发射光波长520~530nm,呈现明亮的黄绿色荧光。其主要优点是:①人眼对黄绿色较为敏感;②通常切片标本中的绿色荧光少于红色。
2.四乙基罗丹明(RB200):为橘红色粉末,不溶于水,易溶于酒精和丙酮。性质稳定,可长期保存。最大吸收光波长为570nm,最大发射光波长为595~600nm,呈橘红色荧光。
3.四甲基异硫氰酸罗丹明(TRITC):最大吸引光波长为550nm,最大发射光波长为620nm,呈橙红色荧光。与FITC的翠绿色荧光对比鲜明,可配合用于双重标记或对比染色。其异硫氰基可与蛋白质结合,但荧光效率较低。
4.藻红蛋白(R-RE):本品为无定形,褐红色粉末,不溶于水,易溶于酒精和丙酮,性质稳定,可长期保存。最大吸引光波长为565nm,最大发射光波长为578nm,呈明亮的橙色荧光。与FITC的翠绿色荧光对比鲜明,故被广泛用于对比染色或用于两种不同颜色的荧光抗体的双重染色。
其他荧光物质
1.酶作用后产生荧光的物质:某些化合物本身无荧光效应,一旦经酶作用便形成具有强荧光的物质。例如4-甲基伞酮-β-D半乳糖苷,受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基伞酮,后者可发出荧光,激发光波长为360nm,发射光波长为450nm。其他如碱性磷酸酶的底物4-甲基伞酮磷酸盐和辣根过氧化物酶的底物对羟基苯乙酸等。
2.镧系螯合物:某些3价稀土镧系元素如铕(Eu3+)、铽(Tb3+)、铈(Ce3+)等的螯合物经激发后也可发射特征性的荧光,其中以Eu3+应用最广。Eu3+螯合物的激发光波长范围宽,发射光波长范围窄,荧光衰变时间长,最适合用于分辨荧光免疫测定。
免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫测定。1.体液免疫测定主要利用抗原与相应抗体在体外发生特异性结合,并在一些辅助因子参与下出现反应,从而用已知抗原或抗体来测知未知抗体或抗原。此外,尚包括检测体液中的各种可溶性免疫分子,如补体、免疫球蛋白、循环复合物、溶菌酶等。2.细胞免疫测定法是根据各种免疫细胞(T细胞、B细胞、K细胞、NK细胞及巨噬细胞等)表面所具有的独特标志和产生的细胞因子等,测定各种免疫细胞及其亚群的数量和功能,以帮助了解机体的细胞免疫水平。体液免疫检测法1.凝集反应。颗粒性抗原(细菌或红细胞等)与相应抗体特异性结合,在电解质参与下形成肉眼可见的凝集物,称之为凝集反应。1)直接凝集反应。颗粒性抗原与相应抗体直接结合所产生的凝集现象,前者多为细胞表面的结构成分,如细菌或红细胞的表面结构抗原。⑴玻片法:多用于抗原的定性检测。⑵试管法:多用于抗体的定量检测。2)间接凝集反应。将可溶性抗原吸附于载体颗粒(如乳胶颗粒、红细胞等)的表面,称之为致敏颗粒。当致敏颗粒与相应抗体结合,即可出现凝集现象。这个反应常用于测定细菌性抗体、病毒性抗体、钩端螺旋体和梅毒螺旋体抗体及某些自身抗体(如抗核抗体、抗肾抗体、抗甲状腺抗体等)。根据凝集反应的原理,还有间接凝集抑制试验、反向间接凝集试验、协同凝集试验等。2.沉淀反应。可溶性抗原(外毒素、血清、细菌培养的滤液、组织浸出液等)与相应抗体特异性结合,在电解质参与下,形成沉淀物,称为沉淀反应。沉淀反应的抗原多为多糖、类脂、蛋白质等。1)单向扩散试验。这是一种抗原定量试验,是可溶性抗原在含抗体的琼脂介质中扩散的沉淀反应。此法常用于检测血清免疫球蛋白和补体各成分的含量。2)双向扩散试验。这是可溶性抗原与抗体在琼脂介质中相互扩散的沉淀反应。本法常用于定性试验,如检测血清免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙型肝炎表面抗原等。单克隆抗体技术3)对流免疫电泳。对流电泳是一敏感快速的检测方法,即在电场作用下的双向免疫扩散。此法常用于检测血清中的乙型肝炎表面抗原与甲胎蛋白等。3.中和试验。特异性抗体可抑制相应抗原物质的活性,抗体使相应抗原的毒性或传染性消失的反应为中和试验。例如抗毒素中和外毒素的毒性,病毒的中和抗体可使病毒失去感染性等。诊断风湿热的抗链球菌溶血毒素“O”试验也为一种中和试验。乙型溶血性链球菌能产生一种溶解人、兔红细胞的溶血毒素“O”,该毒素的溶血毒性可被抗溶血毒素“O”抗体所中和而不出现溶血。试验时将病人血清与溶血毒素“O”混合,作用一段时间后加入人红细胞,红细胞不被溶解为阳性反应,表示病人血清中存在抗溶血毒素“O”抗体。血清抗体效价达400单位以上时提示患者曾感染乙型溶血性链球菌,有助于风湿热的诊断。4.免疫荧光法(荧光抗体法)。是应用荧光素染料(如异硫氰酸荧光黄等)来标记抗体,但不影响其活性,此种抗体称荧光抗体。用已知种类的荧光抗体浸染待检的含有抗原的细胞或组织切片,如有相应抗原存在,则抗原即与此种抗体发生特异性结合,形成复合物而粘着在细胞上,不易洗脱,在荧光显微镜下成为发出荧光的可见物,可达到诊断或定位的目的。包括直接法和间接法。5.酶联免疫吸附试验。本法的原理是利用酶(常用辣根过氧化物酶)标记的抗原或抗体,以测定被检标本中有无相应的抗原或抗体。有间接法、双抗体法、竞争法三种。6.溶血空斑试验。7.免疫印迹技术。免疫印迹或免疫转印技术(immunoblotting或Westernblot)是在Southern(1975)抗体抗原反应创建的DNA印迹术(Southernblotting)基础上发展起来的新型免疫生化技术。细胞免疫检测法近代免疫学广泛采用了细胞生物学、免疫血清学、免疫标记、免疫组化等多方面技术,不断发展和完善了一系列细胞免疫检测技术,用于检测各类免疫细胞的表面标志(包括抗原及受体)、细胞的活化、增殖、吞噬、杀伤功能、各种细胞因子的活性或含量等方面。这些技术为深入研究和认识机体免疫系统的生理、病理改变,阐明某些疾病的发病机制和临床诊治提供了有用的手段。随着细胞免疫学的迅猛发展,时有新的细胞免疫检测技术出现。二十一世纪初期,新发展的项目集中在对有关细胞因子以及细胞受体方面的检测。1.淋巴细胞转化试验。人类淋巴细胞在体外与特异性抗原(如结核菌素)或非特异性有丝分裂原(如植物血凝素,PHA)等一起孵育,T细胞即被激活而向淋巴母细胞转化。T细胞转化过程可伴随有DNA、RNA、蛋白质的合成增加,最后导致细胞分裂。在光学显微镜下可计数转化后的淋巴母细胞数,也可用氚标记的胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入正在分裂的淋巴细胞,用液闪测定仪来确定掺入量以确定淋巴细胞转化率。2000年开始出现一种不用同位素,又可用仪器测量的淋巴细胞增殖反应的检查法,称为MTT检测法。MTT是一种甲氮唑盐,它是细胞线粒体脱氢酶的底物,细胞内的酶可将MTT分解产生蓝黑色成分。该产物的多少与活细胞数成正比,结果可用酶标仪(595nm)测量光密度,作为MTT法的指标。2.E-花环法。人类T细胞表面有羊细胞受体(CD2)能与羊红细胞结合形成玫瑰花样结构。即将分离液分离出的外周的单个核细胞悬液与羊红细胞在体外混合,经37℃培养5~10分钟后放4℃过夜,取细胞悬液计数,外周血淋巴细胞中约70%~80%淋巴细胞结成花环即为T细胞,此法可用来分离T细胞。3.T细胞亚群检测。4.细胞毒试验。Tc细胞、NK细胞、LAK细胞、TIL细胞等对其靶细胞有直接的细胞毒(杀伤)作用。抗体制备常用的检测方法是51Cr(铬)释放法,将51Cr-Na2CrO4盐水溶液与靶细胞(不同的细胞需不同的靶细胞,如NK细胞的靶细胞为K562),于37℃培养1小时左右,51Cr即进入靶细胞,与胞浆结合,洗去游离的51Cr后,即可得到51Cr标记的靶细胞,将待测细胞毒的细胞与51Cr标记的靶细胞混合(比例约为50:1或100:1),靶细胞杀伤越多,释放到上清液中的游离51Cr就越多,且不能再被其他细胞吸收,用γ射线测量仪检测上清液中的cpm值,可计算出待检细胞杀伤活性高低。细胞毒的检测对肿瘤免疫有较大价值。5.巨噬细胞吞噬功能的测定。将中药(10%斑蝥)乙醇浸出液浸渍的滤纸(1cm2大小)置于受试者前臂屈侧皮肤上,4~5小时后取下滤纸。48小时内皮肤局部可水泡,内含巨噬细胞。取水泡液0.5ml加鸡红细胞悬液0.01ml,37℃经30分钟后作涂片、染色与镜检,计算吞噬百分率及每个巨噬细胞吞噬鸡红细胞的平均数。本试验有助于肿瘤病情及疗效的观察。6.移动抑制试验。致敏淋巴细胞与其特异性抗原再次接触时,可以产生移动抑制因子(MIF)。这种因子可以抑制巨噬细胞和中性粒细胞的移动,使之定位于局部而增强其免疫作用。本试验用来观察受检者淋巴细胞在体外受特异性抗原刺激后,有无MIF产生,以测定机体对某种抗原的特异性细胞免疫反应的功能。7.时间分辨荧光测量技术。时间分辨荧光测量技术(time-resolvedfluorometry,TrF)是一项新型的超微量非放射性分析技术。该技术的敏感性和特异性与放射性核素测量技术相仿,但无放射测量的弊端,故问世虽短,进展却极为迅速,有取代放射测量之势。8.细胞因子检测技术。细胞因子的检测,2005年起在中医临床及实验室中已广泛应用。9.细胞受体的检测。受体是细胞表面标志之一,通过对受体的检测,可以了解细胞的功能,并为某些疾病的发病机制提供一定的理论依据。